Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина
Вирусным инфекциям принадлежит ведущая роль в респираторно-кишечных патологиях крупного рогатого скота (КРС). Борьба с этими заболеваниями является актуальной проблемой ветеринарии, так как они наносят большой экономический ущерб. Однако эффективных средств терапии против большинства наиболее распространенных вирусных заболеваний до сих пор нет, а использующиеся вакцины являются недостаточно надежными средствами профилактики.
Препарат «Фоспренил» был зарегистрирован в РФ как противовирусный препарат. Он является продуктом фосфорилирования полипренолов хвои. "Фоспренил" имеет низкую токсичность и относится к безвредным препаратам (1). Противовирусное действие "Фоспренила" было показано для следующих вирусов: чумы плотоядных, бешенства, клещевого энцефалита, гриппа и западного энцефалита лошадей (2).
Несколько лет назад мы начали исследовать действие препарата «Фоспренил» на вирусы КРС, вызывающие респираторно-кишечные патологии. Нами был показан противовирусный эффект для вирусов вирусной диареи на культуре клеток коронарных сосудов теленка (КСТ) и инфекционного ринотрахеита (ИРТ) на культуре клеток легких эмбриона коровы (ЛЭК) /3/.
Чтобы выяснить, зависит ли ингибирование препаратом вируса ИРГ от типа клеток. мы решили поставить опыты на культурe к четок, отличающейся от предыдущей морфологически. Также мы исследовали влияние препарата на вирулентность вирусного урожая. Нами были поставлены опыты in vivo на телятах при лечении вирусных заболеваний смешанной этиологии.
Материалы и методы. В опытах in vitro в качестве тест-системы использовались культуры перевиваемых линий клеток ЛЭК и Taurus-1 (Т-1) (первая морфологически является эпителиоподобной, а вторая фибробластоподобной).
Вирус ИРТ (штамм 4016) титровали, в зависимости от проводимого опыта, на культуре клеток ЛЭК или Т-1. Титр вируса оценивали по 50%-ной тканевой цитопатичсской дозе (ТЦД50).
Для культивирования клеток использовали среду 199 и среду Игла MEM (2x) в равных объемах с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота. В качестве поддерживающей среды использовали той же среды, но без сыворотки. Титрование вируса ИРТ в присутствии препарата и без него проводили по нашей методике.
Для получения урожая вируса заражали культуру клеток Т-1 вирусом ИРТ в разведениях от 10-1 до 10-7 с препаратом и без него. Затем проводили визуальный учет по цитопатичеекому действию (ЦПД) с одновременным снятием и замораживанием параллельных проб при наличии в одной из них ЦПД на четыре креста. Вирулентность полученною урожая вируса оценивали также по ТЦД50. В работе использовался стандартный коммерческий препарат «Фоспренил» производства ЗЛО «Микро-плюс» при НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН.
Все опыты проводились, как макро методом (в стеклянных пробирках) так и микро методом (на пластиковых 96-ти луночных планшетах). После заражения контрольные и экспериментальные пробирки и планшеты с клетками помещали в термостат и содержали при 37oС в атмосфере СО2(5%) в течение 5-ти суток, проводя ежедневные визуальные наблюдения за состоянием культур клеток. Опыты повторяли троекратно.
Опыты in vivo проводили на 90 телятах в возрасте 45 дней со средней массой 50кг. Были сформированы две равные по численности группы: опытная и контрольная. Животные контрольной группы подвергались только антибиотикo- и симптоматической терапии. В опытной - дополнительно применяли 0,4% раствор "Фоспренила" внутривенно в дозе 0,5мл/кг 1 раз в день.
Результаты и обсуждения. Инфекционный титр вируса варьировал от 3,75 до 7,00 lg. Препарат «Фоспренил», содержащийся в культуральной среде в концентрации 200мкг/мл ингибировал репродукцию вируса ИРТ на 1,50-1,75 lg. Задержка ЦПД составила 24 часа. Титр вирусного урожая в контрольных пробах составил от 5,5 до 6,5 lg, в то время как в опытных пробах вирулентность урожая вируса ИРТ не была обнаружена при титре исходного вируса 3,75 lg. Таким образом, мы выяснили, что противовирусное действие препарата не зависит от типа культуры клеток. Однако положительный эффект наблюдался только при совместном введении в тест-систему вируса и "Фоспренила".
В опытах in vivo исследованиями парных сывороток крови телят была установлена этиологическая роль вирусов ИРТ, аденовирусной диареи и парагриппа-3.
Результаты проведенного лечения показали, что у телят в контроле основные клинические признаки болезни наблюдались в течение 7 дней, при этом пало 17,8% животных. В опытной группе летальность составила всего 2,2%; уже на 3-ий день наблюдалось улучшение состояния больных телят, а на 4-ый - разрешение основных симптомов заболевания.
Итоги опыта показали, что применение препарата "Фоспренил" сократило смертность телят на 15,6% и сроки лечения на три дня. Результаты проведенных и исследований, по мнению авторов, позволяют рекомендовать применение данного препарата для лечения и профилактики вирусных инфекций молодняка КРС смешанной этиологии и качестве этиотропного средства.
Литература
1. «Фоспренил»,- АО «Микро-плюс» при НИИ Эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН.
2. Деева А.В., Ожерелков С.В., Новиков Ю.А., Данилов Л.Л., Мальцев С.Д., Наровлянский А.Н., Санин А.В., Пронии А.В. «Фоспренил - противовирусный препарат широкого спектра действия». Ветеринар. - 1998 -№3 с. 15-2 I.
3. Ожерелков С.В.. Соcновская О.К)., Красота А.Ю., Деева А.В., Наровлянский А.Н., Пронин А.В., Санин А.В., Белоусова Р.В. «Особенности противовирусной активности Фоспренила в отношении вирусов домашних и сельскохозяйственных животных». Актуальные проблемы ветеринарии мелких домашних животных. Региональная ветеринарная конференция. Материалы. - 2001.
Опубликовано: Сборник докладов Международной конференции молодых ученых 5-6 декабря 2002 г. Щелково- 2002
