Терапевтическая эффективность гамавита при лечении больных парвовирусным энтеритом собак: контролируемое исследование 

А.В. Санин¹, доктор биологических наук, профессор, руководитель лаборатории клеточного иммунитета (saninalex@inbox.ru), А.В.Пронин¹, доктор биологических наук, профессор, руководитель лаборатории естественного иммунитета (proninalexander@yandex.ru), А.Н. Наровлянский¹, доктор биологических наук, профессор, руководитель лаборатории цитокинов (narovl@yandex.ru), Т.Ю. Тимофеева¹ науч.сотр., В.Ю. Санина¹ к.х.н.,с.н.с, Е.В. Герасимова¹ м.н.с., М.С. Клягина¹ н.с., И.К. Зубашев¹ к.м.н. ст.н.с., Т.Н. Степанова¹ к.б.н.,ст.н.с., Н.В. Вышивкина² вет.врач, Г.В Чермошенцева³ к.в.н. гл.вет.врач, В.В Анников⁴ д.в.н., профессор кафедры «Болезни животных и ВСЭ» ФГБОУ ВПО Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова

¹Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» (ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи) Минздрава России (123098, Москва, ул. Гамалеи, д. 18)

²Ветеринарная клиника «Орикс» (123060, Москва, ул. Расплетина, д. 32)

³Ветеринарная клиника «УНИВЕР-запад» (Москва, ул Сколковское шоссе, д. 32

⁴ ФГБОУ ВПО Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова( 410012, г. Саратов, Театральная площадь, д. 1)

                                            Реферат

Цель исследования заключалась в изучении эффективности применения гамавита (препарата, обладающего свойствами иммуномодулятора, метаболика, детоксиканта, гемостимулятора и адаптогена)  в составе комплексной терапии изучали собак, больных парвовирусным энтеритом (ПВЭ).  

Работа выполнена на больных ПВЭ собаках (n=100) в возрасте от 2 до 6 мес, разделенных на две группы (n=50 в каждой). Собаки опытной группы получали дополнительно гамавит в составе комплексной терапии. Проведены визуально–диагностические (УЗИ), гематологические, клинические, биохимические, а также иммунологические исследования.

У больных собак отмечали снижение содержания эритроцитов до 3,4±0,6×10¹²/л, гемоглобина до 77,9±1,6 г/л, повышение гематокрита до 61,9±1,1 %, лейкопению 3,3±0,5×10⁹/л, сдвиг ядра лейкограммы влево. Включение в курс терапии гамавита способствовало нормализации уровня эритроцитов уже на 5-е сутки, тогда как в контрольной группе нормальный уровень не был достигнут и к 7-м суткам.

Кроме того, подключение гамавита способствовало снижению на 7-е сутки терапии активности АсАТ до 45,3±2,9 Ед/л по сравнению с 64,7±0,7 Ед/л в контроле, а АлАТ, соответственно, до 51,8±1,8 и 68,7±1,1 Ед/л, что подтверждает детоксикационные свойства препарата.

Снижение содержания на 7-е сутки терапии в опытной группе СРБ с 13,5±0,5 мг/л до 8,5±0,1 мг/л и повышение концентрации в опытной группе Т-лимфоцитов с 29,9±1,3 % до 40,1±1,1 % подтверждает наличие у гамавита, соответственно, противовоспалительных и иммунокорригирующих свойств.

В целом, к концу срока исследования (7 сутки) в группе собак, получавших гамавит, исчезли клинические симптомы заболевания, нормализовалась формула крови, а также возвратились к норме  повышенные уровни ЛДГ, АСТ, АЛТ и ЩФ. В контрольной группе собак все данные показатели на 7 сутки оставались еще вне пределов физиологической нормы.

Таким образом, подключение к схеме лечения гамавита, обладающего иммуномодулирующими, детоксицирующими и противовоспалительными свойствами, можно считать полностью клинически оправданным.

Ключевые слова: гамавит, парвовирусный энтерит, собаки, контролируемое исследование

Сокращения: АлАТ — аланинаминотрансфераза, АсАТ — аспартатаминотрансфераза, ЛДГ — лактатдегидрогеназа, ПВЭ — парвовирусный энтерит, РОК — розеткообразующая клетка, СОЭ — скорость оседания эритроцитов, СРБ — С-реактивный белок, УЗИ — ультразвуковое исследование, ЩФ — щелочная фосфатаза

Введение

Парвовирусный энтерит (вирусный геморрагический энтерит собак) — острое контагиозное заболевание, вызванное вирусами из семейства парвовирусов и характеризующееся воспалением и некрозом слизистой оболочки кишечника. В нашей стране ПВЭ входит в пятерку самых распространенных инфекционных болезней собак. Болезнь сопровождается явно выраженной лейкопенией, что ведет к иммунному дисбалансу и, как следствие, к развитию вторичных патологий, нередко заканчивающихся летальным исходом [4].

В составе средств комплексной терапии заболевания применяют различные иммуномодулирующие препараты [2].

Цель исследования

В настоящей работе у больных ПВЭ собак в составе комплексной терапии изучали терапевтическую эффективность гамавита, препарата, который обладает свойствами иммуномодулятора, метаболика, детоксиканта, гемостимулятора и адаптогена [1].

Материалы и методы

Работа выполнена на больных ПВЭ собаках (n=100) в возрасте от 2 до 6 мес, разных пород, обоего пола. Животные были разделены на две группы (n=50 в каждой). Содержание домашне-выгульное, кормление — сухие корма промышленного производства.

Схема лечения включала в себя введение гипериммунной поливалентной сыворотки витакан-5, инфузию кристаллоидов (раствор натрия хлорида 0,9 %, раствор Рингера); профилактику активизации вторичной микрофлоры (цефтриаксон, метрогил), десенсибилизацию и стабилизацию мембран клеток (преднизолон); прменение спазмолитических средств (но-шпа), ингибиторов протеаз (контрикал), блокатора протонной помпы (омепразол). При снижении содержания общего белка ниже нормы (55 г/л) дополнительно вводили инфезол-40.

В комплекс лечебных мероприятий животным первой (опытной) группы в схему лечения для снятия интоксикации и повышения неспецифической резистентности организма включили гамавит производства ЗАО «Микроплюс» в дозах, рекомендованных производителем. Собакам второй (контрольной) группы дополнительно в схему терапии ничего не включали.

Визуально–диагностические исследования (УЗИ) проводили на аппарате «Mindray DP-6600». Брюшную полость пациентов исследовали по стандартному протоколу: оценивали состояние и границы печени, желчного пузыря, почек, кишечника, абдоминальных лимфоузлов.

Для гематологических исследований использовали гемо-анализатор «Hemascrin». Кровь (0,5 мл) для исследования аспирировали до начала лечения, на 1-е, 3-и, 5-е и 7-е сутки терапии, утром натощак из вены предплечья и стабилизировали ее гепарином.

Клинический диагноз при ПВЭ собак подтверждали, выявляя возбудителя ПВЭ в фекалиях инфицированных животных с помощью набора реактивов экспресс–диагностики «VetExpert CPV Ag» (Япония) для парвовирусных инфекций плотоядных.

Для биохимического исследования сывороток крови использовали анализатор «BTS-350» (Испания).

Иммунологические исследования проводили на автоматическом анализаторе «Stat Fax 4700». При этом изучали Т- и В-системы иммунитета, субпопуляции иммунокомпетентных клеток по методу розеткообразования, а также определяли уровнь сывороточных иммуноглобулинов A, M, G.

Вначале из стабилизированной гепарином крови получали взвесь лейкоцитов путем отстаивания в течение 4 ч для получения сыворотки. Далее трехкратным центрифугированием при 1500^-1 (15 минут) выделяли лимфоциты, используя рабочий (14,3%-й) раствор верографина и среду №199. Одновременно с этим отмывали физиологическим раствором эритроциты барана и мыши, центрифугируя в течение 15 мин при 1500^-1. После этого готовили 0,5%-ю взвесь на среде №199. После пятиминутной инкубации при 37 ºС и отстаивания в течение 1 ч при комнатной температуре или в условиях холодильника готовили мазки и окрашивали их по Романовскому—Гимзе. За РОК принимали лимфоцит, присоединивший не менее трех эритроцитов. Подсчитывали относительное число РОК под микроскопом «Биомед-5» под общим увеличением 1000.

Иммуноглобулины А, М, G определяли посредством иммунной диффузии в агаре по Манчини с помощью стрипов «Dyasys» (Германия).

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы «Statistika 6». При этом вычисляли среднюю арифметическую величину и ошибку средней арифметической величины по группам и показателям.

Результаты

Динамика клинико-гематологических показателей при лечении собак, больных ПВЭ. Клинически начало ПВЭ характеризовалось повышением температуры тела на 0,5…1 ˚С, вялостью, отсутствием аппетита, гиперсаливацией, рвотой, диареей сероватого цвета с примесью крови и резким специфическим запахом, беспокойством животных при пальпации мягкой брюшной стенки.

При гематологических исследованиях (табл. 1) на момент обращения за ветеринарной помощью (3-и сутки болезни) отмечали эритропению (3,4±0,6×10¹²/л), анемию (77,9±1,6 г/л) при значительной лейкопении (3,3±0,5×10⁹/л). Эритропения, анемия и лейкопения, очевидно, являются патогномоничными симптомами для начала ПВЭ, что обусловлено негативным влиянием продуктов распада и бурного размножения парвовируса в пейеровых бляшках и красном костном мозге. Повышенный гематокрит (61,0±1,1 %) указывает на обезвоживание организма и необходимость регидратационных мероприятий.

Значительная лейкопения (3,3±0,5×10⁹/л) свидетельствовала о несостоятельности на этом этапе защитно-приспособительных реакций организма и развитии вторичной иммунодепрессии. В ходе дальнейшего исследования (4…5-е сутки) эта тенденция сохранялась. СОЭ повысилась до 30,1±0,3 мм/ч.

Уже через сутки терапии при гематологическом исследовании у собак опытной группы отмечали повышение содержания эритроцитов с 3,4±0,6×10¹²/л до 3,9±0,2×10¹²/л, ослабление лейкопении с 3,3±0,5×10⁹/л до 4,0±0,6×10⁹/л, СОЭ с 30,1±0,3мм/ч до 27,1±1,0 мм/ч. Но уровень гемоглобина продолжал падать (77,9±1,6 г/л в начале лечения и 70,2±1,1 г/л через сутки). Количество юных нейтрофилов с 3,5±0,3 % возросло до 4,1±0,9 %.

1.      Гематологические показатели крови больных ПВЭ собак при лечении (n=100, М±m) Hematological blood indices of dogs  with PVE during treatment

Примечание. ^*р<0,001, ^** р<0,005, ^***р<0,05

У собак контрольной группы наблюдали эритропению — 3,4±0,6×10¹²/л до лечения и 3,1±0,2×10¹²/л через сутки, анемию — 77,9±1,6 г/л до лечения и 70,8±1,3г/л через сутки. При этом отмечали сдвиг ядра влево (количество юных нейтрофилов увеличилось до 5,1±0,8 %), явно выраженную  лейкопению — 3,2±0,7×10⁹/л.

На 3-и сутки терапии у животных опытной группы отмечали незначительный эритроцитоз (3,8±0,3×10¹²/л), незначительно возросла СОЭ относительно первых суток терапии (с 27,1±1,0 мм/ч до 27,8±0,8 мм/ч). Лейкопения начала слабеть (5,0±0,9×10⁹/л в опытной группе и 3,8±0,3×10⁹/л в контроле). Существенных изменений в лейкограмме к этому сроку не наблюдали. Очевидно, значительная лейкопения обусловила иммунодепрессию и развившиеся впоследствии клинические признаки.

Через 5 суток терапии констатировали отсутствие рвоты у собак опытной группы, и ослабление этих же симптомов у животных в контроле. По-прежнему отсутствовали у животных аппетит и прием воды.

При исследовании крови на 5-е сутки лечения у животных опытной группы отмечали нормализацию содержания эритроцитов и гемоглобина (5,5±0,7×10¹²/л и 122,1±3,3г/л, соответственно). К этому сроку у собак контрольной группы эти показатели составили 4,1±0,9×10¹²/л и 100,2±2,1 г/л, соответственно.

Через 7 суток терапии в опытной группе животных отмечали появление аппетита, приема воды, исчезновение диареи. В контроле к этому сроку отмечали лишь отсутствие рвоты и ослабление диареи.

В  анализе крови собак опытной группы на 7-е сутки лечения отмечали повышение содержания лейкоцитов до нижней границы физиологической нормы (6,2±0,3×10⁹/л), в то время как в контроле он составлял 4,6±0,2×10⁹/л, при содержании эритроцитов и гемоглобина в пределах физиологической нормы у собак опытной группы.

Динамика биохимических показателей при лечении собак, больных ПВЭ. При биохимическом исследовании крови (табл. 2) к началу лечения отмечали двукратное повышение активности трансфераз (АлАТ 110,2±1,3 Ед/л, AсАT 89,3±2,3 Ед/л); помимо этого — незначительную гиперкальциемию (4,0±0,5 ммоль/л), гиперфосфатемию (5,2±0,4 ммоль/л). При этом кальций-фосфорное отношение было нарушено (0,8). Была также повышена активность ЩФ (333,7±8,9 Ед/л). Данное состояние можно объяснить как возрастными особенностями собак (возраст 2…6 мес), так и начинающимися нарушениями процессов реабсорбции кальция в кишечнике.

Обращает на себя внимание более чем двукратное повышение активности ЛДГ (730,3±8,4 Ед/л), что характеризует, очевидно, воспалительный процесс в стенках кишечника.

При биохимическом исследовании крови через трое суток терапии отмечали нормализацию значений трансфераз в обеих группах, хотя в контрольной группе эти показатели находились еще на верхних границах физиологической нормы (АлАТ 61,8±2,7 Ед/л, AсАT 54,9±1,2 Ед/л).

Также содержание кальция через трое суток приблизилось к норме: 2,8±0,2 ммоль/л в опытной группе и 2,9±0,2 ммоль/л в контроле; аналогично нормализовалось содержание фосфора: в опытной группе — 2,5±0,4 ммоль/л, а в контроле — 2,6±0,4 ммоль/л. При этом нормализовалось кальций-фосфорное отношение. Активность ЩФ оставалась высокой (337,3±6,1 Ед/л в опыте и 393,2±7,6 Ед/л в контроле). По-видимому, это связанно с процессами катаболизма растущего организма (возраст щенков 2…6 мес).

2. Биохимические показатели крови больных ПВЭ собак при лечении (n=60, М±m) Biochemical blood indices of dogs  with PVE during treatment

Примечание. ^*р<0,001, ^** р<0,005, ^***р<0,05

Активность ЛДГ снизилась в опытной группе до 501,1±9,2 Ед/л, в контрольной — до 627,7±10,9 Ед/л. Столь значительное снижение активности ЛДГ у животных, получавших гамавит, можно считать хорошим диагностическим показателем, указывающим на ослабление воспалительных процессов в стенках кишечника.

На 5-е сутки лечения у собак опытной группы нормализовалось содержание кальция и фосфора (2,7±0,3 ммоль/л и 1,8±0,1 ммоль/л, соответственно), по сравнению с, соответственно, 2,9±0,4 ммоль/л и 3,1±1,2 ммоль/л в контроле. В опытной группе пришло в соответствие кальций-фосфорное отношение, снизилась активность ЩФ (202,1±5,3 Ед/л), тогда как в контрольной группе активность ЩФ оставалась высокой (357,7±6,4 Ед/л). Незначительно уменьшилась активность α-амилазы (1500,1±8,5 Ед/л в опыте). Остальные показатели (AсАT, АлАТ, ЛДГ, липаза) у собак опытной группы находились в пределах физиологической нормы.

У собак контрольной группы также отмечали тенденцию к нормализации значений основных биохимических показателей. Однако возросший уровень α-амилазы (1729,9±7,9 Ед/л) потребовал значительного увеличения дозы ингибитора протеаз, блокатора Н₂- гистаминовых рецепторов, а также блокатора протонной помпы. Значения остальных показателей находились либо около, либо в пределах физиологической нормы.

На 7-е сутки терапии при биохимическом исследовании крови животных опытной группы отмечали нормализацию значений основных биохимических показателей, в то время как у собак контрольной группы по-прежнему была значительно повышена активность ЩФ 279,2±6,7 Ед/л, AсАT 64,7±0,7 Ед/л, АлАТ 68,7±1,1 Ед/л, что свидетельствует о сохраняющихся воспалительных процессах и интоксикации организма.

Динамика иммунологических показателей при лечении собак, больных ПВЭ. Как следует из данных таблицы 3, действие вируса вызвало ослабление функций как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета, в частности были существенно снижены такие показатели, как количество Т- и В-лимфоцитов, содержание иммуноглобулинов.

Повышение к 5-м суткам терапии содержания Т-лимфоцитов в опытной группе с 29,9±1,3 % до 35,9±0,2 %, В-лимфоцитов — с 2,5±0,5 % до 8,9±0,6 % свидетельствует об активации гамавитом Т- и В- клеточных звеньев иммунитета. СРБ до лечения присутствовал в сыворотке крови в существенных количествах (13,5±0,5 мг/л). К 7-м суткам лечения у собак опытной группы его содержание заметно снизилось (8,5±0,1 мг/л), что указывает на ослабление воспалительных процессов, тогда как у животных контрольной группы динамика снижения была менее значимой (до 10,8±0,9 мг/л).

У животных опытной группы, в схеме терапии которых присутствовал гамавит, к 7-м суткам лечения показатели общего белка (67,8±0,8 г/л), альбуминов (25,9±0,8 г/л), глобулинов (31,2±0,4 г/л) вернулись к физиологической норме. Напротив, у собак контрольной группы данные показатели оставались за границами физиологической нормы (белок 55,2±0,6 г/л, альбумины 20,9±0,6 г/л, глобулины 26,8±0,9 г/л).

В опытной группе на 7-е сутки наблюдали нормализацию значений большинства показателей (Т-лимфоциты 40,1±1,1 %, В-лимфоциты 12,4±0,1 %, IgА 2,7±0,3 г/л, IgМ 1,2± 0,1 г/л), тогда как в контроле они оставались ниже нормы (Т-лимфоциты 36,9±0,9 %, В-лимфоциты 10,2±0,5 %, IgА 2,0±0,3 г/л, IgМ 1,0±0,1 г/л), что свидетельствует о наличии иммунодепрессии или вторичного иммунодефицита, который может стать предрасполагающим фактором к развитию реинфекции ПВЭ или суперинфекции.

3. Динамика иммунологических показателей крови больных ПВЭ собак в процессе лечения (n=100, М±m) Blood immunological indices dynamics during treatment of dogs  with PVE

Примечание. ^*р<0,001, ^** р<0,005, ^***р<0,05

Обсуждение

Парвовирусный энтерит собак — инфекционное заболевание, проявляющееся рвотой, геморрагическим энтеритом, миокардитом, лейкопенией, дегидратацией и часто заканчивающееся гибелью животных, особенно молодых [4]. При терапии собак, больных ПВЭ, особое внимание обращают на первоочередное устранение развивающихся интоксикации, дегидратации и гипопротеинемии [3].

Эффективность терапии при ПВЭ зависит от своевременности постановки диагноза, оптимальной комбинации средств специфической и симптоматической терапии [4].

В составе комплексного лечения собак, больных ПВЭ, применяют соответствующую иммунотропную терапию, включающую в себя препараты с широким спектром антивирусного и иммуномодулирующего действия [2].

Подключение к схеме лечения гамавита, обладающего иммуномодулирующими, детоксицирующими и противовоспалительными свойствами, вполне себя оправдало. У собак с диагнозом ПВЭ, получавших гамавит, наблюдали ускоренное снижение клинических симптомов заболевания, быстрее восстановилась формула крови, быстрее нормализовались значения таких показателей, как ЛДГ, АсАТ, АлАТ и СРБ, быстрее восстановились уровни Т- и В-клеточного звеньев иммунитета.

Заключение

Снижение содержания эритроцитов до 3,4±0,6×10¹²/л, гемоглобина до 77,9±1,6 г/л, повышение гематокрита до 61,9±1,1 %, лейкопения 3,3±0,5×10⁹/л при ПВЭ, сдвиг ядра лейкограммы влево, снижение содержания сегментоядерных клеток (40,2±0,6%), лимфоцитоз (31,2±1,0%) и моноцитоз (11,8±0,5 %) свидетельствуют об угнетении гемо- и лейкопоэза. Включение в курс терапии гамавита способствовало нормализации уровня эритроцитов уже на 5-е сутки, тогда как в контрольной группе нормальный уровень не был достигнут и к 7-м суткам.

Снижение на 7-е сутки терапии активности АсАТ до 45,3±2,9 Ед/л в опытной группе по сравнению с 64,7±0,7 Ед/л в контрольной, а АлАТ, соответственно, до 51,8±1,8 и 68,7±1,1 Ед/л, подтверждает детоксикационные свойства гамавита, а нормализация значений такого показателя, как ЛДГ — его противовоспалительную активность.

Снижение содержания на 7-е сутки терапии в опытной группе СРБ с 13,5±0,5 мг/л до 8,5±0,1 мг/л и повышение концентрации в опытной группе Т-лимфоцитов с 29,9±1,3 % до 40,1±1,1 % подтверждает наличие у гамавита, соответственно, противовоспалительных и иммунокорригирующих свойств.

Библиография

1. Иммуномодулятор-метаболик-детоксикант-адаптоген-радиопротектор (Immunomodulator-metabolic-detoхiсant-adaptogen-radioproteсtor). Патент на изобретение N 2194502. По заявке N 2000132668, приоритет от 27.12.2000. Авторы Наровлянский А.Н., Пронин А.В., Санин А.В.

2. Санин А.В. Применение иммуномодуляторов при вирусных заболеваниях мелких домашних животных / А.В. Санин // РВЖ.МДЖ. — 2005. — №1. — С. 38‒42

3. Чермошенцева Г.В. Клинико-морфологическое обоснование эффективности применения гамавитфорте при лечении больных бабезиозом и парвовирусным энтеритом собак (Clinical and morphological substantiation of the Gamavitforte effectiveness in the treatment of babesiosis and parvoviral enteritis in dogs) : автореф. дис. канд. вет. наук (Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии ИП «Экспресс Тиражирование»/  410005, Саратов, Пугачёвская, 161, офис 320), 2012. — 24 с.

4. Шуляк, Б.Ф. Вирусные инфекции собак / Б.Ф. Шуляк. — М.: Опита, 2004. — С. 128‒241.